潔凈室懸浮微生物檢測(cè)方法和要求如下：

1. 懸浮微生物的采樣裝置有以下兩類：

      （1）采用無源采樣裝置，如培養(yǎng)皿。

      （2） 采用有源采樣裝置，如撞擊采樣器、離心采樣器、過濾采樣器。

2. 空氣潔凈環(huán)境中懸浮微生物的靜態(tài)或空態(tài)檢測(cè)前，應(yīng)對(duì)各類表面進(jìn)行擦拭消毒，但不得對(duì)室內(nèi)空氣進(jìn)行熏蒸、噴灑之類的消毒。動(dòng)態(tài)檢測(cè)均不得對(duì)表面和空氣進(jìn)行消毒。

3. 沉降菌檢測(cè)應(yīng)符合下列要求：

      （1） 使用直徑90mm（Φ90）的培養(yǎng)皿采樣。當(dāng)采用其他直徑培養(yǎng)皿時(shí)，應(yīng)使其總面積和90皿總面積相當(dāng)。

      （2） 培養(yǎng)皿中灌注胰蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基，必須留樣作陰性對(duì)照。

      （3） 培養(yǎng)皿表面應(yīng)經(jīng)適當(dāng)消毒清潔處理后，布置在有代表性的地點(diǎn)和氣流擾動(dòng)極小的地點(diǎn)。在亂流潔凈室內(nèi)培養(yǎng)皿不應(yīng)布置在送風(fēng)口正下方。

      （4） 當(dāng)用戶沒有特定要求時(shí)，培養(yǎng)皿應(yīng)布置在地面及其以上0.8m之內(nèi)的任意高度。

      （5） 每一間潔凈室或每一個(gè)控制區(qū)應(yīng)設(shè)1個(gè)陰性對(duì)照皿。

      （6） 動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)時(shí)也可協(xié)商布點(diǎn)位置和高度。

      （7） 培養(yǎng)皿數(shù)應(yīng)不少于微粒計(jì)數(shù)濃度的測(cè)點(diǎn)數(shù)，如工藝無特殊要求應(yīng)大于等于表1中的最少培養(yǎng)皿數(shù)，另外各加1個(gè)對(duì)照皿。

表1 最少培養(yǎng)皿數(shù)

      （8） 當(dāng)延長(zhǎng)沉降時(shí)間時(shí)，可按比例減少最少培養(yǎng)皿數(shù)，為防止脫水，最長(zhǎng)沉降時(shí)間不宜超過1h，當(dāng)所需沉降時(shí)間超過1h，可重疊多皿連續(xù)采樣。除非經(jīng)過驗(yàn)證，證明更長(zhǎng)的沉降時(shí)間可以基本按比例增加菌落數(shù)。

      （9） 培養(yǎng)皿應(yīng)從內(nèi)向外布置，從外向內(nèi)收皿。

      （10） 每布置完1個(gè)皿，皿蓋只允許斜放在皿邊上，對(duì)照皿蓋挪開即蓋上。

      （11） 布皿前和收皿后，均應(yīng)用雙層包裝保護(hù)培養(yǎng)皿，以防污染。

      （12） 收皿后皿應(yīng)倒置擺放，并應(yīng)及時(shí)放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，在培養(yǎng)箱外時(shí)間不宜超過2h。如無專業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，對(duì)于檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)，培養(yǎng)溫度采用（35～37）℃，培養(yǎng)時(shí)間為（24～48）h；對(duì)于檢測(cè)真菌，培養(yǎng)溫度（27～29）℃，培養(yǎng)時(shí)間3d。

      （13） 布皿和收皿的檢測(cè)員必須穿無菌服，但不得穿大褂。頭、手均不得裸露，褲管應(yīng)塞在襪套內(nèi)，并不得穿拖鞋。

      （14） 對(duì)培養(yǎng)后的皿上菌落計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)采用5～10倍放大鏡查看，若有2個(gè)或更多的菌落重疊，可分辨時(shí)則以2個(gè)或多個(gè)菌落計(jì)數(shù)。

      （15） 當(dāng)單皿菌落數(shù)太大受到質(zhì)疑時(shí)，可按以下原則之一進(jìn)行處理：

      1）作為壞點(diǎn)剔除；

      2）重測(cè)，如結(jié)果仍大，以兩次平均值為準(zhǔn)；如結(jié)果很小，可再重測(cè)；

      3）重測(cè)該處微粒濃度，參考此結(jié)果作出判斷。

      所有上述處理方法均應(yīng)記錄在案。

      （16） 每皿平均菌落數(shù)取到小數(shù)點(diǎn)后1位。

      （17） 動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)時(shí)每點(diǎn)疊放多個(gè)平皿或采用可自動(dòng)切換的儀器，每點(diǎn)應(yīng)采滿4h以上，每皿可采30min。當(dāng)只放1個(gè)皿時(shí)，可少于4h，但不可少于1h。

4. 浮游菌采樣應(yīng)符合下列要求：

      （1） 使用單級(jí)或多級(jí)撞擊式采樣器、離心采樣器或過濾采樣器，采樣必須按所用儀器說明書的步驟進(jìn)行，特別要注意檢測(cè)之前對(duì)儀器消毒滅菌，并對(duì)培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基條做陰性對(duì)照。

      （2） 采樣點(diǎn)數(shù)應(yīng)不少于微粒計(jì)數(shù)濃度測(cè)點(diǎn)數(shù)。

      （3） 采樣點(diǎn)應(yīng)在離地0.8m高平面上均勻布置，或經(jīng)委托方（用戶）與檢測(cè)方協(xié)商確定。亂流潔凈室內(nèi)不得在送風(fēng)口正下方布點(diǎn)。靜態(tài)或空態(tài)檢測(cè)前對(duì)室內(nèi)各種表面應(yīng)作擦拭消毒。

      （4） 每點(diǎn)采樣1次，如工藝無特殊要求，每次采樣量應(yīng)大于等于表2推薦的浮游菌最小采樣量。

表2  浮游菌最小采樣量

      每次采樣時(shí)間不宜超過15min，不應(yīng)超過30min。

      當(dāng)潔凈度很高，或預(yù)期含菌濃度可能很低時(shí)，采樣量應(yīng)大于最小采樣量多，以滿足減少計(jì)數(shù)誤差的要求。

      （5） 采樣器應(yīng)用支架固定，采樣時(shí)檢測(cè)人員應(yīng)退出，手持離心式采樣器除外。檢測(cè)人員的穿戴同本附錄3條第15款。

      必須手持采樣器時(shí)，應(yīng)將手臂伸直，站于下風(fēng)向。

      （6） 采樣后宜在2h之內(nèi)將采樣器中的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基條送入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

      （7） 每點(diǎn)平均值取到小數(shù)點(diǎn)后1位。

      （8） 動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的測(cè)點(diǎn)位置、數(shù)量和高度由工藝并經(jīng)協(xié)商確定。每間潔凈室或每一個(gè)獨(dú)立受控環(huán)境中各點(diǎn)總采樣量，不分級(jí)別，均應(yīng)大于1m³。每點(diǎn)可用多臺(tái)采樣器。

      （9） 單點(diǎn)菌落數(shù)太大時(shí)，應(yīng)按附錄3條第15款的原則處理。

5. 表面染菌密度檢測(cè)應(yīng)符合下列要求：

      （1） 對(duì)于潔凈室內(nèi)圍護(hù)結(jié)構(gòu)、設(shè)備等表面的微生物采樣，應(yīng)采用無菌棉拭子擦抹法，當(dāng)表面很大，硬且平時(shí)，也可采用接觸皿法。

      （2） 用規(guī)格板標(biāo)定出面積為25c㎡的區(qū)塊，對(duì)于圍護(hù)結(jié)構(gòu)，每面結(jié)構(gòu)不少于4塊，對(duì)于設(shè)備，每件不少于2塊，取樣地點(diǎn)均協(xié)商確定。

      （3） 將無菌棉拭于含10mL稀釋液試管中浸濕，于管壁上擠干后，對(duì)一區(qū)塊擦抹采樣，橫豎往返8次。每一區(qū)塊使用1根無菌棉拭。采樣后，以無菌操作方式將棉拭采樣端剪入原稀釋液試管中，經(jīng)電動(dòng)混勻器震蕩20s或在手掌振打200次。

      （4） 取含菌液體1.0mL，以瓊脂灌注法接種平皿，每個(gè)樣本接種2個(gè)平皿，于（35～37）℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（24～48）h后計(jì)數(shù)。

      （5） 必須將本次檢測(cè)所用的稀釋液、棉拭子、培養(yǎng)基等留樣作陰性比照。

      （6） 具體事項(xiàng)遵照衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》執(zhí)行。

      （7） 對(duì)于適用接觸皿采樣的表面，以無菌操作方式，先將培養(yǎng)基注入硬質(zhì)或軟質(zhì)Φ55平皿，使培養(yǎng)基表面高出培養(yǎng)皿周邊，測(cè)試時(shí)，將培養(yǎng)皿倒過來，使培養(yǎng)基表面均勻牢固地按壓住整個(gè)區(qū)域5s，不得有環(huán)形或線性的運(yùn)動(dòng)。

      （8） 對(duì)于圍護(hù)結(jié)構(gòu)，每面結(jié)構(gòu)應(yīng)用不少于4個(gè)培養(yǎng)皿按壓，對(duì)于設(shè)備，每件用不少于2個(gè)培養(yǎng)皿按壓。

      （9） 按壓取樣后的培養(yǎng)皿，應(yīng)在2h之內(nèi)，于（35～37）℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（24～48）h后計(jì)數(shù)。

      （10） 菌數(shù)平均數(shù)取到小數(shù)點(diǎn)后1位。

6. 室內(nèi)浮游菌濃度和沉降菌濃度應(yīng)按上面方法進(jìn)行檢驗(yàn)，各點(diǎn)平均值或一點(diǎn)最大值應(yīng)符合設(shè)計(jì)或相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。